甲基化檢測MSP

簡要描述：甲基化檢測MSP：DNA經(jīng)亞硫酸氫鈉處理后，所有未甲基化的胞腔啶發(fā)生脫氨基變?yōu)槟蜞奏?，而甲基化的胞嘧啶則不變，基于這種堿基的改變，然后設計針對甲基化和非甲基化序列的引物并進行聚合酶鏈反應（PCR）擴增，然后通過瓊脂糖凝膠電泳分析，確定與引物互補的DNA序列的甲基化狀態(tài)。

更新時間：2022-12-23
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甲基化檢測原理:

甲基化特異性的PCR是種靈敏度高且操作相對簡單的甲基化研究方法。重亞硫酸鹽處理DNA后，基因組DNA發(fā)生的由甲基化狀態(tài)決定的序列改變。隨后進行引物特異性的PCR。該方法引物設計是關鍵。MSP中設計兩對引物，即一對結(jié)合處理后的甲基化DNA鏈(引物對M)，另一對結(jié)合處理后的非甲基化DNA鏈(引物對U)。檢測MSP增產(chǎn)物，如果用引物M能擴增出片段，則說明檢測位點存在甲基化；若用引物U擴增出片段，則說明被檢測的位點不存在甲基化。

MSP:原理是基于DNA經(jīng)亞硫酸氫鈉處理后，所有未甲基化的胞腔啶發(fā)生脫氨基變?yōu)槟蜞奏?，而甲基化的胞嘧啶則不變?；谶@種堿基的改變，然后設計針對甲基化和非甲基化序列的引物并進行聚合酶鏈反應(PCR)擴增，然后通過瓊脂糖凝膠電泳分析，確定與引物互補的DNA序列的甲基化狀態(tài)。

甲基化檢測優(yōu)點：檢測靈敏度高，樣品消耗少，僅需1μg的基因組DNA,可用于石蠟包埋樣本；快速、簡單，省時。

服務流程：
1.根據(jù)目的基因啟動子序列設計相應的引物；

2.基因組DNA的提取和定量；

3.亞疏酸氫鈉修飾基因組DNA；

4.修飾后DNA純化回收；

5.a.結(jié)合實時定量PCR的qMSP；
b.BSP，對PCR產(chǎn)物進行測序并與未經(jīng)處理的序列比較；

6.數(shù)據(jù)處理：向客戶提供數(shù)據(jù)分析結(jié)果與實驗報告。

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